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PCR实验室分区设置及要求

发布日期:2020-07-28 发布人:admin 浏览数:428

  要求及功能分区PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。四区域分别:1.试剂配制区;2.样品处理区;3.核酸扩增区;4.产物分析区。如使用全自动分析仪,区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。


  各区的功能是:

  1.1、试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。

  1.2、样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。

  1.3、扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。


  2、扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。


  3、使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。


  4、在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:

  4.1、在生物安全柜内操作。

  4.2、每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。

  4.3、盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。

  4.4、用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。


  设计要求:

  PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。


  一、分散形式

  所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。


  二、组合形式

  所谓组合形式PCR实验室,是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染,可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。

PCR实验室

  在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到指定定点,且高度为地面铺装好后2600mm处。如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。

  若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。


  主要设备试剂准备区仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。标本制备区仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。分析区本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的。


  主体结构:主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。标准的四区分隔和气压调节:将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增,产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。


  每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。可打开缓冲区,缓冲区和PCR扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。


  消毒:在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染。


  地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。在建设的过程中应注意:规范的安装流程和全面的服务流程。


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